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1. 毕业设计(论文)的内容和要求
1.文献查阅。
掌握文献查阅的一般方法,学会利用互联网在中国期刊网、维普数据库、超星数字图书馆、Web of Science科学引文索引、Springer Link电子期刊、Elsevier SDOS 电子期刊等检索资源上查阅关于蔗糖合酶与糖基转移酶异源表达及纯化,级联催化反应和反应产物特性等相关文献,对本研究内容有广泛了解。
2.文献阅读及综述。
2. 实验内容和要求
实验内容:通过各类生物信息学软件对微藻来源蔗糖合酶和所选的糖基转移酶进行模拟结构建模和底物分子对接,并通过基因工程手段,以大肠杆菌作为宿主菌,对蛋白酶进行高效表达及纯化。
研究该种属来源的蔗糖合酶和糖基转移酶偶联催化生产功能糖苷类化合物的催化条件。
实验要求:熟悉掌握蛋白质结构建模的思路、方法及流程,构建目标蛋白的重组质粒;明确实验目标,熟悉相关实验仪器的使用,掌握基本实验操作,以大肠杆菌为宿主并诱导产酶,运用蛋白纯化技术获得纯酶。
3. 参考文献
Arriola, M. B., Velmurugan, N., Zhang, Y., Plunkett, M. H., Hondzo, H., lez-Melendi, P., Carbonero, P. (2011). Structure, expression profile and subcellular localisation of four different sucrose synthase genes from barley. Planta, 234, 391-403. doi:10.1007/s00425-011-1408-xCuratti, L., Porchia, A. C., Herrera-Estrella, L., Salerno, G. L. (2000). A prokaryotic sucrose synthase gene ( susA ) isolated from a filamentous nitrogen-fixing cyanobacterium encodes a protein similar to those of plants. Planta, 211(5), 729-735. doi:10.1007/s004250000343De Bruyn, F., De Paepe, B., Maertens, J., Beauprez, J., De Cocker, P., Mincke, S., . . . De Mey, M. (2015). Development of an in vivo glucosylation platform by coupling production to growth: Production of phenolic glucosides by a glycosyltransferase of Vitis vinifera. Biotechnology and Bioengineering, 112(8), 1594-1603. doi:10.1002/bit.25570Diricks, M., De Bruyn, F., Van Daele, P., Walmagh, M., Desmet, T. (2015). Identification of sucrose synthase in nonphotosynthetic bacteria and characterization of the recombinant enzymes. Appl Microbiol Biotechnol, 99(20), 8465-8474. doi:10.1007/s00253-015-6548-7Gutmann, A., Lepak, A., Diricks, M., Desmet, T., Nidetzky, B. (2017). Glycosyltransferase cascades for natural product glycosylation: Use of plant instead of bacterial sucrose synthases improves the UDP-glucose recycling from sucrose and UDP. Biotechnol J, 12(7). doi:10.1002/biot.201600557
4. 毕业设计(论文)计划
第1-2周:查阅文献,熟悉课题有关背景,合理设计实验方案.第3-4周:学习相关生物信息学软件,熟悉实验原理和相关操作。
第5-6周:蛋白质结构建模和蛋白酶的异源表达。
第7-8周:制备粗酶液,探究功能糖苷类化合物的催化生产条件。
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