银杏叶发酵物对团头鲂抗氧化能力的影响研究任务书

1. 1. 毕业设计（论文）的内容、要求、设计方案、规划等

前 言

近年来，随着水产养殖规模化和集约化的推广，世界鱼类养殖业得到了迅猛的发展。然而养殖密度过高，恶劣的水质等应激因子会抑制鱼类的免疫系统，增加其染病几率，并造成养殖鱼类体脂过度沉积的现象，给水产养殖业带来巨大的经济损失。抗生素在水产养殖业中的应用主要可以降低某些营养成分的需求量、促进生长及防治疾病。但是，使用抗生素会抑制鱼类的免疫系统、残留在鱼类组织、导致耐药病原体的产生，污染环境、危害人类健康。并且，大量使用抗生素还会抑制鱼类的生长。这就要求开发新的无污染、无残留、促生长、抗疾病的饲料添加剂产品。

银杏(Ginkgo biloba L.)，银杏科、银杏属植物。其叶中蛋白质、糖、维生素C、维生素E和胡萝卜素含量相当丰富，还含有独特的多种活性成分，黄酮类、萜内酯化合物。研究表明，银杏叶中含有的黄酮类化合物、萜类化合物和有机酸类使其具有抗氧化的特性和清除自由基的药理活性。利用微生物发酵银杏叶可以显著提高银杏叶中的营养物质与有效成分，并且，用于发酵的微生物都是经过筛选的有益菌种，可以有效促进机体的生长发育，提高机体免疫力。发酵银杏叶作为饲料添加剂主要应用于禽畜中，可以有效提高生产性能，增强免疫及抗氧化功能，改善脂肪代谢等，但在水产养殖中未见相关报道。

团头鲂（Megalobrama amblycephala）俗称武昌鱼，鲤形目，鲤科，鲂属，肉质鲜美，生长快，经济价值高，是我国主要的淡水养殖品种之一。但相对于鲤、鲫等鱼类，团头鲂不耐低氧和运输，因此在养殖生产过程中经常受到外界不利因素的影响产生应激，造成受伤、死亡，并且，团头鲂在生长过程中易发生脂肪过度沉积和代谢紊乱，影响其生长。近年来，团头鲂因养殖密度高而病害频发，严重制约着团头鲂产业的发展。本试验以产朊假丝酵母菌与黑曲霉共发酵银杏叶为饲料添加剂，来研究其对团头鲂幼鱼的免疫、抗氧化、脂肪代谢及抗病力的影响，为银杏这一良好的生物资源应用于水产饲料添加剂提供参考依据。

2 材料与方法

2.1试验幼鱼及分组

团头鲂幼鱼购自扬州市国家级水产原良种场。选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂600尾，个体初重为（9.310.09）g/尾。随机分为5组，分别为基础日粮对照组（Cont.）及5个发酵银杏叶（FGB1、FGB2、FGB3、FGB4）组（分别在基础日粮中添加FGB为0.125%、0.25%、0.5%、1.0%），每个重复30尾试验鱼。养殖试验在江苏省南京市浦口区南京农业大学水产养殖基地进行，采用室内可控温循环水系统（规格为直径0.9m，深0.8m）饲养。

2.2试验日粮

银杏叶发酵物为产朊假丝酵母菌与黑曲霉双菌发酵银杏叶的产物，发酵工艺见文献。试验日粮采用全价配合料（表1），主要原料为鱼粉、豆粕、菜粕、棉粕、豆油、鱼油、麸皮、面粉、磷酸二氢钙、预混料、食盐等。各种原料分别粉碎过60目筛，先把磷酸二氢钙、添加剂、生物素混匀，再加大料逐级充分混匀，加适量水，用小型制粒机制成2.0mm的颗粒饲料，避光通风晾干，储存于-20℃冰箱中备用。

2.3日常管理

将幼鱼驯养一周后正式开始养殖试验。每日8:00、12:00、17:00投喂，保持饱食投喂，试验持续60d。饲养过程中每天8:00、16:00测量水温，每周测一次水质。实验期间保持水温250.3℃、水体PH7.0～7.5、氨氮＜0.4mg/L、亚硝态氮＜0.064mg/L。

表1 基础日粮组成及营养水平

Table1 The basic diets and nutrition levels

注：1每千克预混料中含矿物质：硫酸铜2.0g，硫酸铁25g，硫酸锌22g，硫酸镁7g，亚硒酸钠0.04g，碘化钾0.026g，氯化钴0.1g。每千克预混料中含维生素：维生素A9000 000IU，维生素D200000IU，维生素E4500mg，维生素K₃220mg；维生素B₁320mg；维生素B₂1090mg，维生素B₅2000mg，维生素B₆500mg，维生素B₁₂1.6mg，维生素C5000mg，泛酸1000mg，叶酸165mg，胆碱60000mg。

Note: 1Premix supplied the following minerals (per kilogram diet): CuSO₄5H₂O 2.0g, FeSO₄7H₂O 25 g, ZnSO₄7H₂O 22 g, KI, 0.026 g, MnSO₄4H₂O 7 g, Na₂SeO₃ 0.04 g, CoCl₂6H₂O 0.1 g. Premix supplied the following vitamins (per kilogram diet): VA 900000IU, VD 200 000 IU, VE 4 500 mg, VK₃ 220 mg, VB₁ 320 mg, VB₂1 090 mg, VB₅ 2 000 mg, VB₆ 500 mg, VB₁₂ 1.6 mg, VC 5 000 mg, pantothenate 1 000 mg, folic acid 165 mg, choline 60 000 mg.

2.4样品采集

采样前停止饲喂24h，分别对各缸中的鱼计数，称重。从每缸中随机取5尾鱼进行麻醉（MS-222，浓度为100mg/L），注射器尾静脉取血，置于预先准备好的抗凝管中，并于4℃2500转离心，分离血浆，-20℃保存，迅速分离肝胰脏并-20℃保存，迅速分离出腹脂以计算腹脂率。

2.5体组成

测定全鱼的水分、粗蛋白(CP)、粗脂肪(EE)的含量。以上参数的测定参照AOAC(1984)的方法：用105℃烘干至恒重测定样品水分；用FOSS凯氏定氮仪测定粗蛋白含量；用索氏抽提系统通过乙醚抽提失重法测定样品粗脂肪含量。

2.6肝脏抗氧化指标

各抗氧化酶活性测定均采用购自南京建成生物工程研究所的试剂盒。采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性，每毫克组织蛋白在1mL反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位(U)；谷胱甘肽(GSH)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测定利用二硫代二硝基苯甲酸与巯基化合物反应时产生的黄色化合物进行比色定量测定，规定为每毫克蛋白质，每分钟扣除非酶反应的作用，使反应体系中GSH浓度降低1μmol/L为一个谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)酶活力单位；过氧化氢酶(CAT)的测定方法为过氧化氢酶(CAT)分解过氧化氢反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的过氧化氢鱼钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其吸光度值，从而换算出CAT活力；丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定，MDA的单位定义为nmol/mg组织蛋白。

2.7数据统计与分析

试验数据采用平均值标准误表示，采用SPSS 20.0软件中的单因素方差分析法(One-way ANOVA)对数据进行方差分析，并采用Duncan氏法对数据进行显著性检验，差异显著性水平设为P0.05。

2. 参考文献（不低于12篇）

[1] 张旭晖, 都海明, 朱秋凤, 等. α-生育酚琥珀酸酯对肉鸡抗氧化功能与肌肉品质的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2010, 41（3）：286294.

[2] 倪迎冬, 洪文杰, 任灵芝, 等. 大豆黄酮对母鸡蛋品质及后代仔鸡肉品质的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2007, 38（11）：11881194.

[3] 葛长荣, 赵素梅, 张 曦, 等. 不同日粮蛋白质水平对乌金猪肉品质的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2008, 39（12）：16921700.

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