1. 1. 毕业设计（论文）的内容、要求、设计方案、规划等
1、方案拟定：科学合理，具有可行性。论文时间安排： 2014.1.20―2014.3.15：查阅文献，做好预备实验； 2014.3.16－2014.5.20：针对棕榈疫霉菌，筛选出1-2个分子检测靶标，优化检测技术参数，提高分子检测技术准确率，缩短检测时间，建立棕榈疫霉菌的环介导等温扩增技术； 2014.5.21－2014.6.1：整理试验数据，撰写毕业论文，准备答辩。
2、实验数据采集与处理：（1）主要采集南京地区的棕榈、冬青卫茅、构树、柑桔、山茶、百合、西瓜等寄主植物，在寄主植物上分离疫霉菌株。鉴定疫霉菌种类时，对疫霉菌的孢子囊、游动孢子、菌丝和卵孢子等进行形态学观察，同时采用ITS通用引物对其进行测序。（2）棕榈疫霉菌等温环式扩增（LAMP)快速检测技术 1） 等温环式扩增的特异性引物的设计：通过对病原卵菌的核心基因的筛选选择具有保守性的引物序列，利用专门针对恒温环式扩增在线软件对不同疫霉菌设计相关的特异性引物（LAMP引物设计网站地址：http://venus.net-laboratory.com/partner/lamp/index.html)； 2） 检测样品的制备：取样品少量样品用0.5N NaOH研磨后，取10uL研磨产物迅速稀释到490uL Tris-Cl(pH 8.0)中，其中取1.5uL溶液可直接用于恒温环式扩增，这种样品的制备方式可在5min中之内完成； 3）等温环式扩增（LAMP)：在25ul反应总体系中，为了摸索最优的环介导等温扩增技术（LAMP)反应体系，对LAMP反应中的检测技术参数进行优化，主要包括：MgSO4浓度（28 mM），dNTPs浓度（0.41.4 mM），内引物的浓度（0.22 μM），甜菜碱浓度（0.21.4 M），HNB浓度（100300 μM），Bst DNA聚合酶添加量（0.320.64 U/μL），不同反应时间（3090 min）进行优化，确定了最终的反应体系； 4） 恒温环式扩增产物的快速检测：扩增反应前加入羟基萘酚蓝（Hydroxynaphthol dye），反应结束后阳性PCR管中扩增的DNA与染料结合可肉眼直接看到反应产物，阳性呈现天蓝色。
3、结果分析：（1）特异性分析：以研究设计的特异性引物对棕榈疫霉菌进行环介导等温扩增（LAMP）扩增，以水作为阴性对照，并用寄生疫霉、Phytophthora tentaculata、致病疫霉、草莓疫霉、辣椒疫霉、掘氏疫霉、恶疫霉、大雄疫霉、终极腐霉、木贼镰刀、平头炭疽、稻瘟病菌、立枯丝核菌、大丽轮枝菌等基因组作为对照以检测LAMP反应的种间和属间的特异性。（2）灵敏度分析：将10倍递度稀释的棕榈疫霉的基因组DNA（从100 ng μL-1到10 fg μL-1）进行 LAMP反应扩增，于64℃等温条件下反应。测试最低检测灵敏度。（3）建立棕榈疫霉菌的环介导等温扩增（LAMP）技术时，并指出其与普通PCR检测技术和Real-time PCR检测技术对比的结果。
2. 参考文献（不低于12篇）
参考文献
[1] 潘翊，何金洋，刘亚敏，等. LAMP法检测超级细菌NDM-1基因[J]. 医学动物防制，2011，27（5）:433-435.
[2] 韩长志. 樟疫霉 (phytophthora cinnamomi) 的研究进展[J].南京林业大学学报 (自然科学版)，2012，4：33-34．
以上是毕业论文任务书，课题毕业论文、开题报告、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
