1. 毕业设计(论文)的内容和要求
通过近缘物种ghrelin序列设计兼并引物来进行乌苏里拟鲿ghrelin基因的克隆,并对获得的ghrelin基因进行多态位点分析、进化分析及蛋白结构预测,相关研究结果将为今后乌苏里拟鲿ghrelin基因的深入研究奠定基础。
2. 实验内容和要求
1.乌苏里拟鲿ghrelin基因发克隆。
利用PrimerPremier 5.0软件设计引物;在超净台上规范操作提取RNA;反转录合成第一条cDNA后通过PCR扩增目的片段,纯化后连接到pMD18-T载体,并转入DH5 α感受态细胞培养,挑取单个克隆进行测序。
2.乌苏里拟鲿ghrelin测序结果进行序列分析和氨基酸序列分析。
3. 参考文献
[1] Wang G, Lee H M, Englander E, et al. Ghrelin--not just another stomach hormone[J]. Regulatory Peptides, 2002, 105(2): 75-81.
[2] Bednarek M A, Feighner S D, Pong S S, et al. Structure-function studies on the new growth hormone-releasing peptide, ghrelin: minimal sequence of ghrelin necessary for activation of growth hormone secretagogue receptor 1a[J]. Journal of Medicinal Chemistry, 2000, 43(23): 4370.
[3] Reis R A, Garcia R, Queiroz A C D, et al. Acylated and unacylated ghrelin promote proliferation and inhibit apoptosis of pancreatic beta-cells and human islets: involvement of 3'''''''', 5''''''''-cyclic adenosine monophosphate/protein kinase A, extracellular signal-regulated kinase 1/2, and phosphatidyl inosito[J]. Endocrinology, 2013, 148(2): 512-529.
4. 毕业设计(论文)计划
2022.3.20-3.28设计引物及引物的合成。
2022.3.29-4.02乌苏里拟鲿胃组织RNA的提取与反转录合成cDNA。
2022.4.03-4.14目的片段的扩增及纯化回收DNA,并导入质粒。
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