1. 毕业设计（论文）的内容和要求
本研究主要是用基因定点突变、PCR技术、质粒提取以及琼脂糖凝胶电泳等分子生物学手段，引入N-糖基化位点I38T、A69T和N266T。
通过引入N-糖基化位点，来研究N-糖基化位点对重组弹性蛋白酶在毕赤酵母中表达量的影响。
2. 实验内容和要求
任务内容主要有：通过PCR技术进行定点突变，转入大肠杆菌感受态中进行大量扩增，然后提取克隆质粒进行测序，成功后，提取高浓度的克隆质粒，用双酶切切下目的基因，转载表达载体，然后用电击转化法转入毕赤酵母中，筛选出成功的菌株，用甲醇诱导产酶，并将发酵液进行纯化，最后测酶活性，并分析结果。
要求主要是：在实验过程中，要规范操作，得到相应的突变类型的菌株，并记录实验数据，与野生型的菌株产的弹性蛋白酶活性进行对比，分析得出相应的结果。
3. 参考文献
[1]韩铭海. 弹性蛋白酶在毕赤酵母中表达及N-糖基化位点突变对重组酶的影响[D]. 江南大学, 2013.
[2]Han M, Wang X, Ding H, et al. The role of N-glycosylation sites in the activity, stability, and expression of the recombinant elastase expressed by Pichia pastoris [J]. Enzyme and microbial technology, 2014, 54: 32-37.
[3]顾园, 诸欣平, 王少华. 毕赤酵母表达蛋白质的糖基化[J]. 生命的化学, 2004, 24(4): 353-355.
4. 毕业设计（论文）计划
第一阶段：调研、查阅相关资料。
第二阶段：设计实验方案，和大体时间安排。
第三阶段：完成N-糖基化对弹性蛋白酶在毕赤酵母中表达量的影响的实验。
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