1. 1. 毕业设计（论文）的内容、要求、设计方案、规划等
前言：主要强调愈伤组织保存的意义、现状以及愈伤组织保存的影响因子，重点强调温度对愈伤组织保存的影响。
实验方案：
1.超低温保存愈伤组织
（1）超低温保存的预处理
把继代2次后生长状况良好的愈伤组织切成2~3 mm ，放入液氮冷冻管中，加入预冷的冰冻保护剂，在0℃条件下平衡30min后，直接投入液氮罐保存96h。比较各种冰冻保护剂对南林895杨愈伤组织超低温保存的效果，见表1
表1常见冷保护剂对南林895杨愈伤组织保存的影响
编 号 | 冷冻保护剂 | 细胞活力 | 愈伤组织 细胞形态 |
1 | 5%DMSO | ||
2 | 10%DMSO | ||
3 | 15%DMSO | ||
4 | 10%DMSO 5%甘油 | ||
5 | 10%DMSO 10%甘油 | ||
6 | 10%DMSO 15%甘油 | ||
7 | 10%DMSO 0.5mol/L葡萄糖 | ||
8 | 10%DMSO 0.5mol/L山梨醇 |
（2）愈伤组织超低温保存的解冻处理
在选择最佳冷冻剂的基础上，愈伤组织经液氮保存96h,后取出进行以下四种解冻方法试验：(1)在40℃水浴中迅速解冻；(2)置于室温(. 20-25℃ )下解冻；(3)4℃ 冰箱内解冻；(4)试管置于自来水龙头下,用流水冲洗解冻，水温约18℃。解冻后的材料一般都需洗涤，以除去细胞内高浓度的冰冻保护剂，洗涤方法:用含30g/l蔗糖的MS继代培养基在25℃下洗涤10min左右。
表2解冻方法对冷冻愈伤组织生理指标的影响
编号 | 解冻方法 | 细胞活力 （100%） | 愈伤组织 细胞形态 |
1 | 40℃水浴中迅速解冻 | ||
2 | 室温(. 20-25℃ )下解冻 | ||
3 | 4℃ 冰箱内解冻 | ||
4 | 流水冲洗解冻 |
比较四种解冻方法对愈伤组织的影响
（3）超低温保存后的再生培养
将通过以上四种不同解冻方式解冻的愈伤组织，重新接种到新配置的愈伤继代培养基中，观察并记录愈伤组织再生的情况。
表3 四种解冻方式对愈伤组织再生长的比较
编 号 | 解冻方式 | 愈伤组织 净生长量（g） | 愈伤组织 褐化时间（d） | 愈伤组织 生长状态 |
1 | 40℃水浴中迅速解冻 | |||
2 | 室温(. 20-25℃ )下解冻 | |||
3 | 4℃冰箱内解冻 | |||
4 | 流水冲洗解冻 |
选择最佳冷冻保护剂和最佳解冻方式，用于不同继代次数培养的愈伤组织之间的保存比较。
2.低温保存愈伤组织
（1）低温对愈伤组织保存的影响
温度条件设定：4℃、15℃、25℃。
保存方法：将第2次继代培养的南林895杨愈伤组织块切大小约为3 mm 3 mm，每个瓶内接种3-5块.，接种到新鲜MS愈伤继代培养基上，每种温度处理30瓶，重复3次。 一部分实验材料置于组织培养室内常温保存,条件为:温度(25 2)℃,无光照处理;另一部分实验材料置于冰箱中保存,条件设为:4℃和15℃,无光照处理。.
表4 4℃、15℃、25℃下对南林895杨愈伤组织保存的影响
编 号 | 温度 | 愈伤组织 净生长量（g） | 褐变开始 时间（d） | 细胞活力 （%） | 愈伤组织 生长状态 |
1 | 4℃ | ||||
2 | 15℃ | ||||
3 | 25℃ |
将以上3种温度对延缓愈伤组织生长的效果进行比较，选择最佳的保存温度。
实验数据的采集与处理：
采用Excel和SPSS软件对数据进行统计、分析与处理。
结果分析、结论、附表的要求：
要求数据可靠，结果明确，论证有据，图表清晰、逻辑清楚，文句通畅。
2. 参考文献（不低于12篇）
[1]张玉芹,李锡香,马庆,王海平,沈镝.食用百合种质的玻化法超低温保存技术初探[J].中国蔬菜,2004,4:11-13
[2]王艳军,李锡香,向长萍,沈镝,宋江萍(2005).大蒜茎尖玻璃化超低温保存技术研究[J].园艺学报,32(3):507-509
[3]Bouman H, Tiekstra A, Petutschnig E, Homan M, Schreurs R Cryopreservation of Lilium species and cultivars[J].Acta Hort. (2003), 612:147-154
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