浮萍Spirodela polyrhiza中硝酸盐转运蛋白基因的克隆任务书

 2023-02-28 23:10:05

1. 毕业设计(论文)的内容和要求

对浮萍硝酸盐转运蛋白的cDNA序列测序并分析,研究其内外显子的分布并通过RT-PCR研究硝酸盐转运蛋白基因的表达调控等方面,可为揭示硝酸盐转运蛋白的作用和阐明浮萍如何高效吸收利用氮素提供重要的科学依据。

2. 实验内容和要求

本实验为研究浮萍硝酸盐转运蛋白基因的基因序列及表达调控等方面,揭示硝酸盐转运蛋白的作用,对浮萍中六种硝酸盐转运蛋白SpNTchr1#1、SpNTchr1#2、SpNTchr1#3、SpNTchr3#1、SpNTchr9#1、SpNAR2chr12的cDNA序列进行研究。以RNA为模板通过PCR扩增及TA克隆得到其cDNA序列,由已知的全长序列对比cDNA序列,研究其外显子和内含子的分布情况。下一步实验将依据所获得的基因序列进行RT-PCR,对浮萍硝酸盐转运蛋白的表达调控进行研究分析,以更一步了解硝酸盐转运蛋白吸收利用氮素的作用及机制,为揭示硝酸盐转运蛋白的作用及浮萍如何高效吸收利用氮素提供重要的科学依据。

3. 参考文献

[1]王亚艳, 张剑刚, 倪鹏平, 等.原位生态修复技术在城市河道中的应用[J].环境工程, 2015,65(3): 11-16.

[2] 种云霄, 胡洪英, 钱易.大型水生植物在污水处理中的应用研究进展[J].环境污染治理技术与设备,2003,4(2): 36-40.

[3] 鲍姝, 方扬, 靳艳玲, 等.污水氮磷浓度对云南本地浮萍生长及氮磷去除的影响[J].应用与环境生物学报,2014,20(1): 56-62.

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4. 毕业设计(论文)计划

浮萍Spirodela polyrhiza的基因组序列已经测序完成,分析发现S.polyrhiza硝酸盐转运蛋白SpNTchr1#1、SpNTchr1#2、SpNTchr1#3、SpNTchr3#1、SpNTchr9#1、SpNAR2chr12基因全长序列完整。

为了研究S.polyrhiza硝酸盐转运蛋白的理化性质和其表达调控机理,本实验克隆并测序了SpNTchr1#1、SpNTchr1#2、SpNTchr1#3、SpNTchr3#1、SpNTchr9#1、SpNAR2chr12等基因的cDNA序列。

通过提取浮萍总RNA,以其中mRNA为模板,扩增cDNA的第一条链,再以第一条链为模板PCR扩增cDNA,通过TA克隆克隆cDNA,并送去上海生工测序部进行测序,研究其内外显子分布。

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