1. 毕业设计（论文）的内容和要求
以前期已筛选到的具备先天生境优势和优良生防效果的内生细菌L031为基础，以青霉菌定殖柑橘为切入点，探究其对青霉定殖、侵染柑橘引致腐烂的抑菌机制.
2. 实验内容和要求
一、材料的培养、制备 1）内生细菌L031发酵液的制备：将直径 7mm 的菌饼接种到LB液体培养液中（250mL 三角瓶，发酵培养基装瓶量为 50mL），28℃，120r/min 摇床培养 2d后，以 10 的接种量，装料量 90 mL/250 mL，接入新的LB培养液中进行二次发酵，25℃，100r/min 摇床培养 4d，即为发酵液原液。 2）青霉菌繁育培养：将实验室保存的意大利青霉，接种到PDA平板，25℃培养至产孢，待用。 3）柑橘接种：试验用柑橘选择新鲜的芦柑（Citrus reticulate Blanco cv. Ponkan）为材料。将果实用0.1次氯酸钠溶液消毒，用无菌水冲洗2-3次，自然晾干。浸泡在L031发酵液原液中12h，然后取出自然风干，再挑取青霉分生孢子接种于柑橘表皮刺伤处，具体方法参照韩青梅等（韩青梅等, 2013），置于保湿器，25℃培养。二、试验内容与技术：1）抑菌效果测定利用皿内对峙法或摇培法，测量内生细菌L031对青霉菌的孢子萌发及菌丝生长的的抑制效果。观察时间点为处理后的6h, 12h, 18h, 24h，无菌水处理为对照。每组试验重复3次。2）酶活测定：内生细菌L031发酵液原液处理接种柑橘部位后的6h, 12h, 18h, 24h，随机选3-5个取样点，取果实表面伤口处1-2cm组织样品5.0 g，液氮冻存后至于-80℃保存/待用。利用氧化还原法，测定青霉菌胞壁降解酶（纤维素酶或半纤维素酶或果胶酶）活性，明确处理前后胞壁降解酶的活性变化情况。3）组织学观察：内生细菌L031发酵液原液处理接种后的柑橘果实后，于6h, 12h, 18h, 24h取伤口处样品，利用显微观察技术结合染色技术，观察L031对青霉菌的分布、定殖及侵染情况影响特征；
3. 参考文献
4. 毕业设计（论文）计划
1）完成内生细菌L031发酵液发酵制备、青霉菌的培养与接种；2）完成受抑制的孢子萌发、分布特征观察；3）完成受抑制青霉菌丝生长特征观察；4）完成L031处理后的组织学样品的取样与制备；
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