在前导肽引入N-糖基化位点促进弹性蛋白酶在毕赤酵母中的表达任务书

 2023-05-15 09:30:14

1. 毕业设计(论文)的内容和要求

本课题主要是通过利用基因定点突变、质粒提取、化学转化、电击转化及目的基因的亚克隆等分子生物学操作手段,在蛋白的前导肽中引入糖基化位点,来研究糖基化位点对重组弹性蛋白酶表达量的影响。

2. 实验内容和要求

任务内容主要有:通过定点突变技术,将获得的目的基因转入大肠杆菌中进行大量扩增,然后提取克隆质粒进行测序,成功后,提取高浓度的克隆质粒,构建表达载体,然后用电击转化法转入毕赤酵母中,筛选出转化成功的菌株,再利用甲醇诱导,最后测定酶的表达量。

要求:在实验过程中,要规范操作,得到相应的突变类型的菌株,并记录实验数据,与野生型的菌株产的弹性蛋白酶进行对比,分析得出能提高表达量的糖基化位点情况。

3. 参考文献

[1]刘小杰, 陈启和. 弹性蛋白酶的研究进展[J]. 中国食品添加剂, 2004, 4:29-32.

[2]杨梅. 毕赤酵母蛋白表达系统研究进展[J]. 生物技术通报, 2011(4): 46-51.

[3]韩铭海. 弹性蛋白酶在毕赤酵母中表达及N_糖基化位点突变对重组酶的影响[D]. 江南大学,2013.

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4. 毕业设计(论文)计划

第一阶段:调研、查阅相关资料。

第二阶段:设计实验方案,和大体时间安排。

第三阶段:完成糖基化对毕赤酵母表达的重组弹性蛋白酶稳定性的影响实验。

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