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1. 毕业设计（论文）的内容和要求
课题简介天然来源的硫酸化糖类大多来自于海洋生物，如岩藻聚糖硫酸酯、卡拉胶（硫酸半乳聚糖）、海胆多糖、海藻多糖、海洋硫酸鼠李糖等，具有独特的结构和聚阴离子的性质，在抗炎、抗凝血，抗氧化、抗病毒、增强免疫，以及肿瘤辅助治疗等方面发挥巨大作用。
硫酸基转移酶是酶法合成硫酸寡糖的重要工具酶，硫酸转移酶需要PAPS为硫酸基供体，构建PAPS循环再生体系是重要研究课题，ATP硫酸化酶是PAPS合成的关键酶之一，原核表达存在表达量低、表达产物为包涵体、表达产物没有活性等问题，因此ATP硫酸化酶的原核高效表达是制备硫酸寡糖过程中非常重要的步骤 内容要求 1. 文献检索及阅读掌握文献检索的能力，熟练使用多种检索资源查阅关于ATP硫酸化酶表达的国内外相关文献。
2. 明确实验任务，拟定实验方案通过阅读国内外相关文献，了解研究动态，确实实验内容及方案，拟定科学可行的研究计划。
2. 实验内容和要求
实验内容：1. ATP硫酸化酶基因优化合成2. 原核表达ATP硫酸化酶的质粒构建3. ATP硫酸化酶的纯化4. ATP硫酸化酶的酶学性质表征实验要求：1. 寻找到最适合进行原核表达的ATP硫酸化酶基因，对基因进行密码子优化，以便进行原核表达2. 选择合适的原核可溶表达策略，构建质粒并表达3. 采用合适的方式对ATP硫酸化酶进行纯化，得到纯度的重组酶4. 对酶活、酶活回收率、比活等酶活参数进行测定，并初步探究最适反应温度和pH
3. 参考文献
1. Cadwallader A B , Yost H J . Combinatorial expression patterns of heparan sulfate sulfotransferases in zebrafish: III. 2-O-sulfotransferase and C5-epimerases[J]. Developmental Dynamics, 2007, 236(2):581-586.2. Wang W , Ju X , Sun Z , et al. Overexpression of heparan sulfate 6-O-sulfotransferase-2 enhances fibroblast growth factor-mediated chondrocyte growth and differentiation[J]. International Journal of Molecular Medicine, 2015.3. Vu T T T , Jeong B , Krupa M , et al. Soluble Prokaryotic Expression and Purification of Human Interferon Alpha-2b Using a Maltose-Binding Protein Tag[J]. Journal of Molecular Microbiology and Biotechnology, 2016:359-368.4. Controlled Chemoenzymatic Synthesis of Heparan Sulfate Oligosaccharides[J]. Angewandte Chemie, 2018, 130(19).5. Thieker D F , Yongmei X , Digantkumar C , et al. Downstream Products are Potent Inhibitors of the Heparan Sulfate 2-O-Sulfotransferase[J]. Scientific Reports, 2018, 8(1):11832-.6. Qianwen L , Tiange C , Yinghong H , et al. A Review of the Structure, Preparation, and Application of NLCs, PNPs, and PLNs[J]. Nanomaterials, 2017, 7(6):122-.7. Meneghetti M C , Gesteira T , Tashima A K , et al. Insights into the role of 3-O-sulfotransferase in Heparan Sulfate biosynthesis[J]. Org. Biomol. Chem. 2017:10.1039.C7OB01533J.8. Rong J , Habuchi H , Kimata K , et al. Substrate Specificity of the Heparan Sulfate Hexuronic Acid 2- O Sulfotransferase [J]. Biochemistry, 2001, 40(18):5548-5555.9. Weihua J , Shuai L , Jiale C , et al. Increased soluble heterologous expression of a rat brain 3- O -sulfotransferase 1 A key enzyme for heparin biosynthesis[J]. Protein Expression and Purification, 2018, 151:23-29.10. Liu C , Sheng J , Krahn J M , et al. Molecular Mechanism of Substrate Specificity for Heparan Sulfate 2-O-Sulfotransferase[J]. Journal of Biological Chemistry, 2014, 289(19):13407-13418.
4. 毕业设计（论文）计划
1.2020.12.28-2021.1.12 文献检索，进行课题研究进展研究2.2021.2.28-2021.3.31 设计ATP硫酸化酶的原核表达体系构建3.2021.4.1-2021.4.30 ATP硫酸化酶表达优化4.2021.5.1-2021.5.31 ATP硫酸化酶的纯化及酶学性质表征5.2021.6 毕业论文的撰写
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