1. 毕业设计（论文）的内容和要求
丁二酸是一种具有重要应用价值的四碳二羧酸，作为前体被广泛用于合成药品及生物可降解性聚合物中。由于丁二酸广泛的工业应用，除了改善发酵策略之外，还可以通过构建以可再生碳源为底物，易培养，高转化效率，高产量丁二酸的优良基因工程菌，进而来提高其产丁二酸的能力.
为了增加琥珀酸的产量和收率，本实验从增加产琥珀酸的前体物质PEP的积累角度，缺失pyk基因，该基因即是从PEP到丙酮酸的关键基因，强化从PEP到草酰乙酸，再到琥珀酸的代谢途径。首先从谷氨酸棒菌中通过PCR扩增得到基因pyk，构建重组质粒pk18mobsacB-pyk,然后通过酶切自连的手段缺失pyk基因中的一部分序列，构建质粒pk18mobsacB-Dpyk，将此重组质粒电转整合进谷氨酸棒杆菌，该步可以积累产琥珀酸的前体物质PEP，强化谷氨酸棒杆菌产琥珀酸的能力，提高琥珀酸的产量，经过验证成功之后，最后我们将二次重组菌加入适当的培养基中进行发酵培养，从而来大规模地证实这种方法可以提高谷氨酸棒杆菌产琥珀酸的能力，并且能够增加菌体代谢葡萄糖的能力。
要求
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2. 参考文献
[1]魏文德.有机化工原料大全[M].北京:化学工业出版社,1989.
[2]司杭.化工产品手册[M].北京:化学工业出版社,1985.
[3]邝生鲁,贡长生.丁二酸的开发与应用前景.化工时刊[J].1991, 1:24～26.
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