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1. 毕业设计（论文）的内容和要求
内容：基于毕赤酵母易于培养，生长速度快，可进行高密度连续发酵的特性，本课题以分泌表达人血清白蛋白的重组毕赤酵母为出发菌株，通过高密度发酵的方式，优化发酵工艺，最终提升目标蛋白的产量。
要求：（1）构建可分泌表达人血清白蛋白的重组毕赤酵母；（2）以构建的可分泌表达人血清白蛋白的重组毕赤酵母为出发菌株，通过摇瓶发酵确定产量最高的2-3株重组菌株；（3）选定较高产量的重组菌株进行高密度发酵培养，并优化发酵条件；
2. 实验内容和要求
1 掌握毕赤酵母表达质粒的构建方法；2 掌握毕赤酵母感受态细胞的制备、电击转化、菌落PCR等实验方法；3 掌握摇瓶发酵、发酵罐高密度发酵的实验操作；4 学习并掌握整理实验数据、分析实验结果并得到相应的实验结论的能力。
3. 参考文献
1. Human serum albumin: From bench to bedside[J]. Molecular Aspects of Medicine, 2011.2. Zhu, Wen, Gong, et al. High level expression and purification of recombinant human serum albumin in Pichia pastoris[J]. PROTN EXPRESSION AND PURIFICATION, 2018.3. Chen Z , He Y , Shi B , et al. Human serum albumin from recombinant DNA technology: Challenges and strategies[J]. Biochimica Et Biophysica Acta, 2013, 1830(12):5515-5525.4. Ohya T , Ohyama M , Kobayashi K . Optimization of human serum albumin production in methylotrophic yeast Pichia pastoris by repeated fed-batch fermentation.[J]. Biotechnology rnai, Anik, Tang C , Bengtsson O , et al. Expression of endoglucanases in Pichia pastoris under control of the GAP promoter[J]. Microbial Cell Factories, 2014, 13.9. Fu X Y , Zhao W , Xiong A S , et al. High expression of recombinant Streptomyces sp. S38 xylanase in Pichia pastoris by codon optimization and analysis of its biochemical properties.[J]. Molecular Biology Reports, 2011, 38(8):4991-7.10. Karbalaei M , Rezaee S A , Farsiani H . Pichia pastoris: A highly successful expression system for optimal synthesis of heterologous proteins[J]. Journal of Cellular Physiology, 2020, 235(9).
4. 毕业设计（论文）计划
2020.12-2021.01 下载并阅读与课题相关的文献，完成开题报告2021.02-2021.03 构建毕赤酵母相关的表达质粒，转化至毕赤细胞并筛选出重组菌株；2021.03-2021.05 进行摇瓶发酵和发酵罐高密度发酵，并优化相应的发酵条件，提高产量；2021.05-2021.06 整理实验数据并撰写毕业论文。
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