1. 1. 毕业设计（论文）的内容、要求、设计方案、规划等
前言部分：清晰准确的描述研究意义，适当引用前人的研究进展；完整准确切入本研究的切入点；简明扼要地介绍拟解决的关键问题。
传统抗生素能显著提高畜禽的生产性能，但这些抗生素在畜禽体内的残留容易造成食品安全性问题，而天然植物饲料添加剂具有绿色、安全、无毒副作用或毒副作用低等特点，因此开发天然植物资源作为抗菌药物的替代物已成为饲料领域的研究热点之一。
银杏又称白果，属裸子植物银杏科的单型种，银杏叶中含有黄酮类、萜类、酚类等多种活性成分，具有抗菌消炎、抗病毒、抗氧化能力等作用。银杏叶及银杏叶的提取物，已经被广泛应用于医疗、食品防腐剂、植物保护和化妆品等领域，但国内对银杏叶作为饲料添加剂的研究较少。本研究旨在利用银杏叶中活性物质的药用价值，用以替代抗生素，探求银杏叶在畜禽生产中的推广应用前景。
近年来，益生菌以其独特的作用方式和生态效应，已被广泛应用于食品、医疗、畜禽和水产养殖等领域。在养殖业中相对使用抗生素而言，作为新型绿色添加剂的益生菌，由于其无残留、无污染以及不产生耐药性等特点，有其独特的优越之处，已逐步应用于畜禽业生产。
芽孢杆菌类微生物是一类好氧、可形成芽孢的革兰阳性菌，是国际公认的可在饲料制剂中食用的微生物菌种。
已有研究表明，芽孢杆菌在不利环境条件下能以孢子形式存在，在饲料制粒、贮存及胃酸环境中仍能保持较高的活性，在改善畜禽生产性能、维持肠道菌群平衡、提高消化率等方面均有较好的效果。芽孢杆菌为需氧菌，在生长过程中消耗大量的氧气，使肠道内氧气浓度降低，为肠道内的双歧杆菌、乳酸杆菌等生理性厌氧菌的生长繁殖提供有利环境；同时，使得需氧的有害病原菌的生长由于缺氧而受到抑制，从而使菌群失调得以调整、肠道功能得以恢复，最终使胃肠道的微生态体系处在健康平衡的状态，动物的免疫力得到提高。芽孢杆菌在生长代谢过程中能产生多种抗菌物质，如短杆菌肽、枯草菌素和多粘菌素等，对常见的致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有较强的抑制作用。芽孢杆菌在生长的过程中，可产生蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶等多种助消化酶，同时在消除抗营养因子上也发挥了重要作用。
目前国内关于芽孢杆菌在饲料中的应用研究也比较多，而且取得了一定的应用效果。陈家祥等（2010）研究发现，日粮中添加地衣芽孢杆菌有益于肉鸡的肠道发育和盲肠微生物区系平衡，饲养前期50mg/kg添加水平，饲养后期200mg/kg添加水平显著优化了肉鸡的肠道组织结构，抑制了盲肠中有害菌的生长。周振峰（2006）研究发现，每千克精饲料中20亿单位的地衣芽孢杆菌可显著提高泌乳奶牛产奶性能，同时奶品质有所改善，并且奶牛抵抗热应激的能力增强。但目前尚无以银杏叶为主要原料，以益生菌芽孢杆菌为菌株，进行固态发酵制备的产品的研究报道，本研究将制备的产品应用于饲料添加剂中，以获得更为有效的饲喂效果。
方案拟定：实验的设计根据本课题组的方案统一进行。试验设计、材料与方法的描述要合理。
1. 地衣芽孢杆菌银杏叶固态发酵物的制备
1.1 营养盐溶液的配制：按葡萄糖1.5%（即每100mL营养盐溶液中含葡萄糖1.5g，下同），K2HPO4 0.3%，MnSO4 0.02%，MgSO47H2O 0.05%，FeCl3 0.01%的量依次称取并溶解于水中，配成营养盐溶液；
1.2 固体培养基的制备：按银杏叶粉末：豆粕：麸皮=7:2:1的比例称取三者，混匀；
1.3 按每10g固体培养基加12mL营养盐溶液的比例将上述两者混合，搅拌均匀，配制成发酵培养基；将配制好的发酵培养基在121℃温度下灭菌1h，取出，冷却；
1.4 在接种室进行常规的无菌操作，每10g发酵培养基接种地衣芽孢杆菌2mL（地衣芽孢杆菌的培养采用液体法，常规的种子液体培养法，37℃、180r/min下摇瓶培养），37℃下培养48h，发酵结束；
1.5 在低于80℃的条件下干燥，粉碎，即得。
2. 体内动物试验
选用1日龄（1 d）健康、体重相近的AA肉仔鸡180只（P0.05），按单因子完全随机设计分为3个处理，每个处理60只（含6个重复，每个重复10只鸡）。分别为基础日粮对照组（Contr.组）、0.3%地衣芽胞杆菌发酵银杏叶添加组和0.6%地衣芽胞杆菌发酵银杏叶添加组。试鸡自由采食和饮水，喂养时遵循少喂勤添的原则，采用常规管理与免疫，试验期42d。期间共进行两次称重（21和42 d），称重前一天19:00断料，不断水，第二天08:00空腹称重和结料，计算采食量（FI）、体增重（BWG）及料重比（F/G）。整个饲养过程中不饮用电解多维或与VE相关的物质。
试验日粮参照NRC（1994）建议的家禽营养需要，采用玉米-豆粕型日粮。日粮分前期（0-21d）和后期（21-42d）两个阶段，采用重量替代法配制，在不同的日粮处理组中，用同样重量的麸皮来替代等量的银杏叶发酵物，日粮组成及主要营养水平见表1。日粮组成及主要营养水平见表1。
表1 日粮组成及营养水平（风干基础，%）
Table 1 Formulation and calculated composition of broiler diets (on fed basis, %)
日粮组成 Ingredient /% | 0-3周0-3 weeks | 4-6周 4-6 weeks | |
玉米 Maize | 60.64 | 64.08 | |
豆粕 Soybean meal | 30.82 | 24.03 | |
玉米蛋白粉 Corn gluten meal | 2.0 | 4.0 | |
麸皮 Wheat bran | 0.6 | 1.0 | |
猪油 Lard | 2.03 | 2.83 | |
石粉 Limstone powder | 1.1 | 1.27 | |
磷酸氢钙 Calcium bicarbonate | 1.39 | 1.27 | |
食盐 Sodium chloride | 0.2 | 0.25 | |
L-赖氨酸 Lysine-HCL | 0.07 | 0.16 | |
蛋氨酸 DL-Methionine | 0.15 | 0.1 | |
1%预混料a 1% Premixa | 1.5 | 1 | |
总计 Total | 100 | 100 | |
日粮营养成分* Nutrition levels* | |||
代谢能 ME（MJ/kg） | 12.27 | 12.77 | |
粗蛋白 Crude protein /% | 21.2 | 19.3 | |
钙 Calcium /% | 1.0 | 0.91 | |
有效磷 Available Phosphorus /% | 0.43 | 0.38 | |
L-赖氨酸 L-Lysine /% | 1.08 | 0.95 | |
蛋氨酸 DL-Methionine /% | 0.50 | 0.44 | |
蛋＋胱 DL-Methionine cystine /% | 0.82 | 0.74 | |
注：1) *为计算值。
2) a：每kg饲粮提供：铁，60mg; 铜, 7.5mg; 锌, 65mg; 锰, 110mg; 碘, 1.1mg; 硒, 0.4mg; 维生素A, 4500IU; 维生素 D3, 1000IU; 20mg; 维生素 K, 1.3 mg; 维生素 B1, 2.2mg; 维生素 B2, 10 mg; 维生素 B3, 10mg; 胆碱, 400mg; 维生素 B5, 50mg; 维生素 B6, 4mg; 维生素H, 0.04mg; 维生素 B11, 1mg; 维生素 B12, 1.013mg。
实验数据采集与处理，测定的指标与方法如下：
2.1 生长性能
分别于1d、21d和42d称重。称重前一天19:00断料，不断水，第二天07:00（此前停饲12h，自由饮水）空腹称体重（BW），并统计饲料消耗情况。以各重复为单位计算不同生长阶段鸡的体增重（BWG）、采食量（FI）及料重比（F/G）。记录肉仔鸡每天的死亡情况，在21d和42d计算死淘率。
2.2 血清生化指标的测定
血清的总蛋白和白蛋白测定采用南京建成生物工程研究所提供的商业化试剂盒进行测定。胆固醇（TC）测定采用胆固醇氧化酶-过氧化物酶终点法，甘油三酯（TG）测定采用甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶终点法，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量采用硫酸葡聚糖镁沉淀法（PTA-Mg2 ），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL）含量采用聚乙烯硫酸盐（PVS）一步沉淀法。所有指标均用试剂盒以比色法测定。
实验数据采集与处理：详细做好实验记录，数据分析用SPSS或SAS数据分析软件。要求会用Excle进行常规作图。
结果分析：对结果与分析的描述要求准确到位。
讨论和结论：应论点明确，重点突出，不能与结果重复、离题。
2. 参考文献（不低于12篇）
指定阅读的中文参考文献如下：
[1] 林淑慧. 银杏叶提取物对肉鸡免疫功能影响的研究[D]. 福州：福建农林大学, 2009.
[2] 金 立. 中药-银杏叶复合饲料添加剂的制备及效果研究[D]. 南京：南京农业大学, 2009.
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